病原体检测试剂盒操作的几大要点须知

　　病原体检测试剂盒是一种经典的利用DNA荧光染色法检测支原体污染的试剂盒，其原理是当细胞发生凋亡时，染色质会固缩，Hoechst染色后在荧光显微镜下观察，正常细胞的细胞核呈正常的蓝色，而凋亡细胞的细胞核会呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染，颜色有些发白。
 
　　病原体检测试剂盒操作步骤：
　　（一）贴壁细胞
　　1、将盖玻片置于6孔板或其他培养皿内，接种细胞培养过夜，使融合率约为50%~80%。
　　2、加入干预条件使细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入Hoechst固定液。
　　3、去除固定液，用PBS或生理盐水洗2次。洗涤时宜用摇床，或手动晃动。
　　4、加入Hoechst 染色液，孵育。也宜用摇床，或手动晃动数次。
　　5、弃染色液，PBS或生理盐水洗2次，吸尽液体。洗涤时宜用摇床，或手动晃动。
　　6、滴一滴抗荧封片剂于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，避免气泡。
　　（二）悬浮细胞
　　1、加入Hoechst固定液，缓缓恳起细胞，固定10min或更长时间（亦可4℃过夜）。
　　2、低速离心去除固定液，用PBS 或生理盐水洗2次。洗涤时手动晃动数次。
　　4、稍晾干，使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。
　　5、均匀滴上Hoechst染色液。用吸水纸从边缘吸去液体，微晾干。
　　6、弃染色液，用PBS或生理盐水洗2次，吸尽液体。洗涤时宜用摇床手动。
　　7、滴一滴抗荧光封片剂于载玻片上，盖上一洁净的盖玻片，尽量避免气泡。
　　8、荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。
　　（三）组织切片
　　1、常规包埋切片。用PBS 或生理盐水洗2次。洗涤时手动晃动数次。
　　2、均匀滴上Hoechst染色液。.
　　3、弃染色液，PBS或生理盐水洗2次，吸尽液体。洗涤时宜用摇床或手动。
　　4、将切片置于载玻片上，滴一滴抗荧光封片剂，盖上一洁净的盖玻片，尽量避免气泡。
　　5、荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。激发波长350nm左右，发射波长460nm左右。