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病原体检测试剂盒操作的几大要点须知

  • 发布日期:2022-06-13      浏览次数:241
    •   病原体检测试剂盒是一种经典的利用DNA荧光染色法检测支原体污染的试剂盒,其原理是当细胞发生凋亡时,染色质会固缩,Hoechst染色后在荧光显微镜下观察,正常细胞的细胞核呈正常的蓝色,而凋亡细胞的细胞核会呈致密浓染,或呈碎块状致密浓染,颜色有些发白。
       
        病原体检测试剂盒操作步骤:
        (一)贴壁细胞
        1、将盖玻片置于6孔板或其他培养皿内,接种细胞培养过夜,使融合率约为50%~80%。
        2、加入干预条件使细胞发生凋亡后,吸尽培养液,加入Hoechst固定液。
        3、去除固定液,用PBS或生理盐水洗2次。洗涤时宜用摇床,或手动晃动。
        4、加入Hoechst 染色液,孵育。也宜用摇床,或手动晃动数次。
        5、弃染色液,PBS或生理盐水洗2次,吸尽液体。洗涤时宜用摇床,或手动晃动。
        6、滴一滴抗荧封片剂于载玻片上,盖上贴有细胞的盖玻片,避免气泡。
        (二)悬浮细胞
        1、加入Hoechst固定液,缓缓恳起细胞,固定10min或更长时间(亦可4℃过夜)。
        2、低速离心去除固定液,用PBS 或生理盐水洗2次。洗涤时手动晃动数次。
        4、稍晾干,使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。
        5、均匀滴上Hoechst染色液。用吸水纸从边缘吸去液体,微晾干。
        6、弃染色液,用PBS或生理盐水洗2次,吸尽液体。洗涤时宜用摇床手动。
        7、滴一滴抗荧光封片剂于载玻片上,盖上一洁净的盖玻片,尽量避免气泡。
        8、荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。
        (三)组织切片
        1、常规包埋切片。用PBS 或生理盐水洗2次。洗涤时手动晃动数次。
        2、均匀滴上Hoechst染色液。.
        3、弃染色液,PBS或生理盐水洗2次,吸尽液体。洗涤时宜用摇床或手动。
        4、将切片置于载玻片上,滴一滴抗荧光封片剂,盖上一洁净的盖玻片,尽量避免气泡。
        5、荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。激发波长350nm左右,发射波长460nm左右。
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